Шаг 1. Настройка и конфигурация (Setup and Configuration)

Вход в систему (Log-in)

Если функция входа включена, при открытии любого окна Gold Nouveau (например, "Method Development" или "Instrument") появится диалоговое окно с запросом имени пользователя и пароля. Введите имя и пароль, назначенные вашим руководителем. Если система не распознаёт введённые данные, вы получите сообщение об ошибке.

Конфигурация системы (System Configuration)

Вы должны настроить систему при первом использовании или после внесения изменений в приборы, детекторы или подключения. Ваша копия программного обеспечения настроена на заводе для работы с определённым количеством инструментов и детекторов, которые вы приобрели.

Конфигурация системы включает ввод информации об инструментах, детекторах, плате аналого-цифрового преобразователя, опциональном управлении насосом, опциональном BCD-ридере и принтерах, подключённых к вашей системе. Подробные инструкции по настройке системы приведены в "Gold Nouveau Installation Guide".

Примечание: После изменения настроек конфигурации системы необходимо выйти из программного обеспечения и перезапустить его, чтобы изменения вступили в силу.

Проверка аналогового сигнала (Verification of Analog Signal)

Используйте функцию предварительного просмотра (Preview) для проверки сигналов детектора.

Шаг 2. Настройка параметров сбора данных (Setup acquisition parameters)

Перед сбором первого образца необходимо настроить систему, указав информацию о том, как следует собирать данные. Это включает установку параметров метода, необходимых для анализа вашего первого стандартного образца.

Настройка сбора (Acquisition Setup)

1. Нажмите Method в строке меню.

2. Выберите Acquisition Setup, чтобы открыть диалоговое окно для настройки параметров сбора. Это окно позволяет задать такие параметры, как время анализа и частота дискретизации. После завершения настройки нажмите OK для сохранения или Cancel для отмены изменений.

Конфигурация канала (Channel Configuration)

• Канал (Channel): Выберите канал, к которому применяются параметры сбора.
• Статус канала (Channel Status): Определяет, включён ли канал. Если канал выключен, данные по нему собираться не будут.

Частота дискретизации (Sampling Frequency)

Этот параметр определяет, как часто записываются точки данных. Нажмите на стрелку вниз, чтобы просмотреть список частот, поддерживаемых вашей конфигурацией системы. При выборе частоты дискретизации под полем выбора отображается сообщение с указанием минимальной ширины пика (по основанию), которая может быть адекватно проинтегрирована с использованием этой частоты.

Важно: Для многоканальных методов частота дискретизации каждого активного канала должна быть кратной частоте других каналов.

Время анализа (Run Time)

Определяет продолжительность сбора данных.

Задержка сбора (Acquisition Delay)

Определяет интервал между началом анализа (триггером) и началом сбора данных для канала.

Анализ после сбора (Analyze After Acquisition)

Включите эту опцию, если хотите, чтобы система автоматически проанализировала данные сразу после сбора.

Настройки триггера (Trigger Settings)

Определяют, как инициируется сбор данных:

• Нет (None): Сбор начинается сразу после нажатия Start. Пакетный сбор продолжается без паузы между запусками.
• Вручную (Manual): Требует от оператора нажатия Enter для начала каждого запуска. Пакетный сбор приостанавливается для подтверждения между запусками.
• Замыкание контакта (Contact Closure): Сбор начинается при замыкании контакта.
• Размыкание контакта (Contact Open): Сбор начинается при размыкании контакта.

Шаг 3. Сбор предварительного стандартного образца (Acquire preliminary standard sample)

Для использования графических возможностей системы при создании метода необходимо проинжектировать стандартную смесь, содержащую пики, которые вы планируете калибровать. Этот предварительный стандартный образец будет использоваться для оптимизации параметров интеграции и заполнения калибровочных таблиц.

Запуск одиночного анализа (Start Single Run)

1. Нажмите кнопку Run Single в окне инструмента.

2. Появится диалоговое окно, в котором необходимо указать:

• Идентификатор образца (Sample ID): Уникальный идентификатор для вашего образца.
• Имя метода (Method Name): Имя метода, который вы собираетесь использовать.
• Имя файла (Filename): Имя файла, в котором будет сохранена хроматограмма (Save Run As).

Этот шаг является критически важным, так как позволяет системе собрать предварительные данные, необходимые для последующей оптимизации и калибровки.

Шаг 4. Оптимизация интеграции (Optimize Integration)

Используя сохранённый файл данных стандартного образца, проверьте интеграционные базовые линии по умолчанию и используйте графические инструменты системы для их оптимизации.

Интеграция по времени (Integration Timed Events)

1. Нажмите Analyze, чтобы убедиться, что ваша хроматограмма проинтегрирована.

2. Если вы не видите базовую линию:

• Нажмите Options, затем Annotation.
• Убедитесь, что флажок Baseline установлен. Базовая линия должна появиться на хроматограмме.
• Если базовая линия по-прежнему не отображается, проверьте, будет ли выбранный цвет для её отрисовки виден на вашем экране (нажмите Options, затем Colors для проверки цветов).

3. Если вас устраивают базовые линии в текущем виде, настройка интеграции не требуется, и вы можете перейти к следующему шагу.

4. Если пики проинтегрированы неудовлетворительно, оптимизируйте параметры интеграции, как описано ниже.

Повторный анализ данных (Re-analyze your data)

После изменения параметров интеграции для вашего образца повторно проинтегрируйте и просмотрите новые базовые линии. Для этого:

• Нажмите Analysis/Analyze или кнопку Analyze.
• Просмотрите базовые линии и при необходимости снова откорректируйте параметры интеграции, пока базовые линии не будут назначены корректно.

Этот шаг обеспечивает точную настройку параметров интеграции для корректного представления хроматографических данных образца перед калибровкой и дальнейшим анализом.

Шаг 5. Анализ хроматограммы (Analyze chromatogram)

Меню Analysis позволяет:

• Повторно проинтегрировать активную хроматограмму с использованием текущих параметров метода.
• Печатать отчёты.
• Указывать события, выполняемые сразу после анализа.

Дополнительные возможности включают:

• Выполнение одноуровневой калибровки.
• Просмотр информации из отчёта для активной хроматограммы.
• Ручное исправление существующей хроматограммы путём выбора нужного варианта в меню Analysis.

Графическое программирование событий (Graphical Events Programming)

Для графического определения пиков:

1. Убедитесь, что текущая хроматограмма — та, которую вы хотите использовать.

2. У вас уже должна быть создана калибровочная таблица пиков в методе.

3. Хроматограмма должна быть проанализирована.

Процедура:

1. При отображении файла со стандартом в окне хроматограммы нажмите Method, затем Graphical Events Programming.

2. В меню Graphic Events или на панели Tools выберите Def Peaks.

3. Щёлкните мышью слева от первого стандартного пика на хроматограмме.

4. Щёлкните мышью один раз справа от последнего стандартного пика в вашей хроматограмме.

Диалоговое окно параметров ФДМ (PDA Options Dialog)

Это диалоговое окно позволяет указать, как данные отображаются и сохраняются:

• Статус канала (Channel Status): Включите или выключите канал анализа.
• Канал анализа (Analysis Channel): Выберите канал для хроматограммы, которую вы хотите проанализировать. Именно на этом канале будет активным детектирование пиков.
• Анализ после сбора (Analyze After Acquisition): Выберите этот пункт, если хотите, чтобы хроматограмма была проанализирована сразу после завершения прогона.
• Опции хранения (Storage Options): Выберите режим хранения: 3D или Multi-Chromatogram.

Опции масштабирования хроматограммы (Chromatogram Scaling Options)

• Масштабирование, заданное пользователем (User Specified Scaling): Задайте время начала/окончания и диапазон напряжения вручную.
• Автомасштабирование по самому большому пику (Autoscale to Largest Peak): Автоматически масштабировать хроматограмму по самому большому пику.
• Автомасштабирование по второму по величине пику (Autoscale to 2nd Largest Peak): Полезно при наличии большого пика растворителя.
• Автомасштабирование по третьему по величине пику (Autoscale to 3rd Largest Peak): Полезно для дальнейшего разрешения пиков при наличии доминирующих пиков.

Если выбран любой из вариантов Autoscale, поля "Start Time" и "Stop Time" игнорируются, и будет отображена полная хроматограмма.

Шаг 6. Настройка калибровки (Setup Calibration)

Теперь, когда интеграция для метода настроена правильно, необходимо подготовить метод к калибровке.

Создание таблицы пиков (Define Peaks)

Самый простой способ создать список пиков в стандартной смеси — сделать это графически, используя сохранённый файл данных стандартного образца. Gold Nouveau автоматически введёт времена удерживания. Вам останется только заполнить названия пиков, уровни концентрации и указать опорные пики и/или внутренние стандарты.

1. Если вы используете метод с внутренним стандартом, введите ID внутреннего стандарта для каждого пика.

2. В столбце "Level 1" введите концентрацию каждого пика в вашей стандартной смеси. Обратите внимание, что Gold Nouveau автоматически заполнит единицы измерения, указанные ранее.

3. После завершения списка названий компонентов и концентраций для уровня 1 выйдите из таблицы пиков, дважды щёлкнув в левом верхнем углу окна таблицы.

Эти действия позволят корректно настроить калибровку метода перед переходом к следующим этапам анализа.

Шаг 7. Выполнение одноуровневой калибровки (Run Single Level Calibration)

После завершения настройки калибровки в методе вы готовы выполнить калибровку. В данном примере вы повторно запустите стандарт калибровки. Однако также можно использовать сохранённый файл данных стандартного образца, выбрав команду Analysis/Start Single Run.

Процедура:

1. Запуск калибровки: Нажмите кнопку Run Single. Система Gold Nouveau запросит информацию, необходимую для выполнения калибровочного прогона.

2. Диалоговое окно Single Run Calibration: Также возможно выполнение калибровки стандартного образца без использования последовательности (Sequence), если вы проводите одноуровневую калибровку и анализируете образцы по одному, а не партиями.

• Из окна инструмента нажмите кнопку Run Single на панели команд. Откроется диалоговое окно Start Single Run.
• Укажите нужные параметры для прогона, включая идентификатор образца, имя метода и имя файла для сохранения данных.
• Нажмите OK для запуска калибровки.

Система выполнит анализ стандартного образца и автоматически создаст калибровочную кривую на основе введенных концентраций компонентов.

Проверка результатов калибровки

После завершения калибровки система отобразит результаты, включая коэффициенты корреляции (R) и детерминации (R²) для каждой калибровочной кривой. Для аналитических применений эти значения должны превышать 0,999, что свидетельствует о хорошей линейности калибровки [pharmabeginers.com](https://pharmabeginers.com/a-complete-guide-on-hplc-calibration-part-1-of-3/)[pharmabeginers.com](https://pharmabeginers.com/calibration-of-hplc-system-sop-and-format/).

Если результаты неудовлетворительны, проверьте:

• Правильность ввода концентраций стандартов
• Качество хроматографических пиков (симметрия, разрешение)
• Параметры интеграции
• Стабильность системы во время анализа

Шаг 8. Просмотр калибровочной кривой (Review Calibration Curve)

После выполнения калибровки важно проверить качество калибровочных кривых для каждого компонента.

Доступ к калибровочным кривым

1. В меню Analysis выберите Calibration, затем Review Calibration Curve.

2. В открывшемся окне будет отображена калибровочная кривая для выбранного компонента.

3. Вы можете переключаться между компонентами с помощью выпадающего списка.

Анализ параметров калибровки

В окне просмотра калибровочной кривой отображаются следующие параметры:

• Уравнение калибровки: Линейное уравнение вида y = mx + b, где y — площадь пика, x — концентрация.
• Коэффициент корреляции (R): Степень линейной зависимости между концентрацией и откликом.
• Коэффициент детерминации (R²): Доля вариации отклика, объясняемая линейной моделью.
• Остатки: Отклонения экспериментальных точек от расчетной линии.

Критерии приемлемости

Для аналитических применений калибровочные кривые должны соответствовать следующим критериям [pharmabeginers.com](https://pharmabeginers.com/a-complete-guide-on-hplc-calibration-part-1-of-3/)[pharmabeginers.com](https://pharmabeginers.com/calibration-of-hplc-system-sop-and-format/):

• Коэффициент корреляции (R) ≥ 0,999
• Коэффициент детерминации (R²) ≥ 0,998
• Остатки не должны превышать ±10% от среднего значения
• Отсутствие систематических отклонений в остатках

Корректировка калибровки

Если калибровочные кривые не соответствуют критериям:

• Проверьте и при необходимости измените исключенные точки
• Переопределите весовые коэффициенты (1/X, 1/X²)
• Измените тип уравнения регрессии (линейное, квадратичное)
• Повторите калибровку с новыми стандартами

Шаг 9. Сбор одиночного неизвестного образца (Acquire Single Unknown Sample)

После успешной калибровки можно приступать к анализу неизвестных образцов.

Подготовка к анализу

1. Убедитесь, что калибровка прошла успешно и калибровочные кривые соответствуют критериям приемлемости.

2. Подготовьте неизвестный образец в соответствии с требованиями метода.

3. Проверьте, что метод анализа загружен и настроен правильно.

Запуск анализа

1. Нажмите кнопку Run Single в окне инструмента.

2. В диалоговом окне Start Single Run укажите:

• Идентификатор образца (Sample ID): Уникальное имя для вашего образца.
• Имя метода (Method Name): Метод, используемый для анализа.
• Имя файла (Filename): Имя файла для сохранения хроматограммы.

3. Нажмите OK для запуска анализа.

Мониторинг анализа

Во время анализа вы можете:

• Просматривать реальное время хроматограммы
• Проверять параметры сбора данных
• Приостанавливать или останавливать анализ при необходимости

Завершение анализа

После завершения сбора данных система автоматически выполнит анализ, если в настройках метода включена опция Analyze After Acquisition. Результаты будут доступны в отчетах.

Шаг 10. Просмотр отчётов (Review Reports)

Gold Nouveau предоставляет различные типы отчетов для анализа результатов.

Доступ к отчетам

1. После завершения анализа нажмите Analysis в строке меню.

2. Выберите Reports, затем тип отчета, который вы хотите просмотреть.

Основные типы отчетов

• Отчет по концентрациям (Concentration Report): Содержит информацию о концентрациях компонентов в образце.
• Отчет по пикам (Peak Report): Детализированная информация о хроматографических пиках.
• Отчет о соответствии (Suitability Report): Параметры, подтверждающие пригодность системы для анализа [www.pharmaguideline.com](https://www.pharmaguideline.com/2017/09/system-suitability-in-hplc-analysis.html).
• Сводный отчет (Summary Report): Обобщенная информация по всем образцам в последовательности.

Настройка отчетов

1. В меню Reports выберите Report Setup.

2. Выберите шаблон отчета или создайте новый.

3. Настройте поля, которые должны быть включены в отчет:

• Идентификатор образца
• Время удерживания
• Площадь пика
• Концентрация
• Процент площади
• Относительное время удерживания

4. Сохраните настройки отчета для последующего использования.

Печать и экспорт отчетов

Отчеты можно:

• Печатать непосредственно из программы
• Экспортировать в текстовые файлы (.txt)
• Экспортировать в форматы таблиц (.csv, .xls)
• Сохранять в PDF для архивирования

Шаг 11. Создание последовательности пакетной обработки (Create Batch Sequence)

Для анализа нескольких образцов автоматически используется функция пакетной обработки (Batch Processing) [images.bid-on-equipment.com](https://images.bid-on-equipment.com/prod-documents/879-GOLDNouveauChromatographyWorkstationSoftwareForWindows-0.pdf)[pharmablog.in](https://pharmablog.in/operation-of-high-performance-liquid-chromatography/).

Открытие окна последовательности

1. В строке меню выберите Method, затем Batch Sequence.

2. Откроется окно Sequence Table для создания новой последовательности.

Заполнение таблицы последовательности

В таблице последовательности необходимо указать следующие параметры для каждого образца [pharmablog.in](https://pharmablog.in/operation-of-high-performance-liquid-chromatography/):

• Vial #: Номер пробирки в автосэмплере.
• Tray #: Номер лотка, если используется многолотковый автосэмплер.
• Sample Name: Имя образца.
• Sample ID: Уникальный идентификатор образца (например, Blank, Standard).
• Method File: Имя файла метода для анализа.
• Data File: Имя файла для сохранения результатов.
• Sample Type: Тип образца (Standard, Unknown, Blank и т.д.).
• Level: Уровень концентрации (для калибровочных стандартов).

Создание последовательности

1. Введите данные для каждого образца в соответствующие столбцы таблицы.

2. Используйте функцию Auto Increment для автоматического заполнения номеров пробирок.

3. Проверьте правильность введенных данных.

4. Сохраните последовательность, выбрав File → Save Sequence As.

Дополнительные параметры

В настройках последовательности можно указать:

• Параметры инъекции (объем, скорость)
• Условия анализа (температура колонки, поток мобильной фазы)
• Параметры детектирования
• Опции обработки данных

Шаг 12. Выполнение последовательности пакетной обработки (Run Batch Sequence)

После создания последовательности можно запустить автоматический анализ всех образцов [pharmablog.in](https://pharmablog.in/operation-of-high-performance-liquid-chromatography/).

Запуск последовательности

1. В строке меню выберите Method, затем Run Batch Sequence.

2. В диалоговом окне выберите сохраненную последовательность.

3. Проверьте параметры анализа и подтвердите запуск.

Мониторинг выполнения

Во время выполнения последовательности отображается:

• Текущий статус анализа (выполняется, завершен, ошибка)
• Номер текущей пробирки
• Имя анализируемого образца
• Прогресс выполнения последовательности

Обработка ошибок

При возникновении ошибок система может:

• Приостановить выполнение последовательности
• Пропустить проблемный образец и продолжить анализ
• Остановить всю последовательность

Выбор поведения при ошибках настраивается в параметрах последовательности.

Завершение последовательности

После завершения всех анализов:

• Система автоматически обработает данные всех образцов
• Будут сгенерированы отчеты по каждому образцу
• Результаты будут доступны для просмотра и экспорта

Просмотр результатов

1. В меню Analysis выберите Review Results.

2. Выберите последовательность для просмотра результатов.

3. Просматривайте результаты по отдельным образцам или в сводном виде.